Novel Coronavirus (2019-nCoV) Kit Deteksi Asam Nukleat (Fluorescent RT-PCR)

【Dimaksudkan Gunakan】

Kit tersebut adalah TaqMan menyelidiki fluoresen waktu-nyata PCR untuk mendeteksi secara kualitatif ORF1ab, n gen nukleat asam dari 2019-nCoV di usap tenggorokan, dahak pada pasien dengan dugaan gejala pneumonia dan pengelompokan kasus.

Hasil tes hanya untuk referensi klinis dan tidak bisa dianggap sebagai satu-satunya patokan untuk klinis diagnosis. itu Direkomendasikan untuk membuat analisis yang termanifestasi dengan memperhatikan gejala klinis dan hasil laboratorium lainnya

operator harus memiliki pengalaman pelatihan profesional dalam amplifikasi gen atau pengujian metode biologi molekuler, dan memiliki kualifikasi yang relevan untuk operasi laboratorium. Laboratorium harus memiliki tindakan pencegahan keamanan biologis dan prosedur pelindung.

【 prinsip uji 】

dalam kit ini, primer dan probe dirancang untuk masing-masing wilayah ORF1ab yang dikonservasi dan spesifik, n dari 2019-nCoV, . fluoresen PCR digunakan untuk mendeteksi rna virus setelah nukleat pemurnian asam sampel RNA.

Ini test kit menggunakan fluorescent real-time PCR teknologi. Selama PCR amplifikasi, probe mengikat ke template, dan 5'-end kelompok reporter probe dibelah oleh Taq enzim (5 '→ 3' aktivitas eksonuklease), dengan demikian menjauh dari kelompok quenching untuk menghasilkan sinyal fluorescent . Kurva amplifikasi waktu nyata secara otomatis diplot berdasarkan sinyal fluoresensi yang terdeteksi, dan nilai ct sampel dihitung (Jumlah siklus yang dialami ketika sinyal fluoresensi di setiap tabung reaksi mencapai ambang batas yang ditetapkan). FAM , VIC dan texas red fluorophores adalah dimanfaatkan untuk menandai ORF1ab gen, probe gen n dalam reaksi solusi. dengan menggunakan satu tes, deteksi kualitatif dari dua gen di atas 2019-nCoV dapat dilakukan secara bersamaan.

Untuk untuk menghindari hasil negatif palsu, kit dilengkapi dengan kontrol internal (IC), yang ditandai dengan Cy5 kelompok fluoresen yang bisa digunakan untuk memantau prosedur ekstraksi dan reaksi solusi.

【 komponen utama 】

catatan ¹ : Banyak komponen berbeda tidak bisa menjadi ditukar.

catatan ² : The test kit tidak mengandung nukleat reagen ekstraksi asam, harap siapkan reagen sebelum digunakan.

1. penanganan sampel

tambahkan 10μL pengendalian internal menjadi 200μL kontrol positif dan kontrol negatif, masing-masing untuk melakukan nukleat asam ekstraksi.

2. reagen persiapan:

sistem persiapan: ambil pra-instal Nuklir lyophilizer amplifikasi asam, dilakukan dengan membuka kantong foil dan segera disentrifugasi jumlah sampel dari setiap tes harus jadilah kelipatan 8 yang berisi satu kontrol positif dan satu negatif kontrol.add 35μL nuclease-free air ke setiap reaksi tabung.

3. Sampel Memuat:

tambahkan 5μL sampel nukleat asam yang akan diuji, kontrol positif, kontrol negatif bahwa seluruh volume reaksi adalah 40 μL dalam reaksi yang dialokasikan solusi. untuk itu tidak memerlukan campuran halus, dan tutup saja PCR tabung reaksi, sentrifus cairan di dinding tabung di atas bagian bawah tabung, sehingga memproses PCR Amplifikasi.

setelah verifikasi, diperkirakan bahwa penambahan 5μL-10μL minyak parafin di PCR sistem tidak akan mempengaruhi PCR hasil tetapi hindari kontaminasi dan cairan penguapan.